002550肝素粗品库存（肝素是抗凝剂吗）

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检测肝素钠粗品需要哪些检测手段

德国肝素钠专用树脂工艺流程怎么处理

肝素概念股有哪些

肝素钠粗品长期收留会变质吗?

肝素抗凝就是肝素钠抗凝吗?谢谢

为什么说肝素是高效的抗凝剂

肝素钠为什么要用鱼精蛋白拮抗

Q1：检测肝素钠粗品需要哪些检测手段

检测肝素钠粗品
材料及方法
1、DNA提取
1.1. 所需材料：
试剂盒：
ChargeSwitch® gDNA Rendered Meat Purification Kit (Product #CS400-100)
PowerClean® DNA Clean-Up Kit (Product# 12877-50)
BioGX Ruminant and Porcine Beads (Product # 204-0002)
设备要求:
Micro centrifuge
Heat Block
Nuclease Free Water
Vortex
Invitrogen Magna Rack
2.0 mL Tubes
Smart-Cycler
Smart Cycler centrifuge
Smart Cycler cooling block
SmartCycler 25 ?L reaction tubes
1.2. 操作步骤
a. 加入混匀的肝素钠样品到2ml离心管的0.5ml标记线。
*关键步骤：每次只加一个样，前一个样品加样完成前不能打开下一个离心管。
b. 加入1ml ChargeSwitch Lysis Buffer到样品中。往离心管加入裂解缓冲液时，离心管稍微倾斜。
c. 每样加入100μlChargeSwitch SDS。涡旋5s混匀。
d. 95℃孵育（水浴或加热箱）5min。
e. 每样加入400μl ChargeSwitchPrecipitation Buffer（N5）。涡旋5s混匀。
f. 冰浴离心管5min沉淀蛋白。
g. 室温16100g离心5min。
h. 转移1200μl上清液到一个新的离心管中。
i. 涡旋装有ChargeSwitch Magnetic Beads的离心管，充分重悬浸泡在储存缓冲液中的磁珠。
j. 加入200μlChargeSwitch Detergent到含上清液的离心管中。
k. 加入40μl充分重悬的ChargeSwitch Magnetic Beads。
l. 上下吹打5次混匀。
m. 室温孵育1min。
n. 把离心管放到MagnaRack上直至ChargeSwitch Magnetic Beads形成紧密沉淀，上清变清澈（约
1min）。
o. 离心管留在磁铁上，小心吸掉上清不搅浑沉淀。吸取上清时枪头不要对着沉淀物。
p. 从磁铁取下离心管。
q. 加入1ml ChargeSwitch Wash Buffer到离心管，上下吹打5次混匀。
r. 把离心管放到MagnaRack上直至ChargeSwitch Magnetic Beads形成紧密沉淀，上清变清澈（约
1min）。
s. 离心管留在磁铁上，小心吸掉上清不搅浑沉淀。吸取上清时枪头不要对着沉淀物。
t. 从磁铁取下离心管。
u. 加入750μl ChargeSwitchWash Buffer到离心管，上下吹打5次混匀。
v. 把离心管放到MagnaRack上直至ChargeSwitch Magnetic Beads形成紧密沉淀，上清变清澈（约
1min）。
w. 离心管留在磁铁上，小心吸掉上清不搅浑沉淀。吸取上清时枪头不要对着沉淀物。
x. 加入750μl ChargeSwitchWash Buffer到离心管，上下吹打5次混匀。
y. 把离心管放到MagnaRack上直至ChargeSwitch Magnetic Beads形成紧密沉淀，上清变清澈（约
1min）。
z. 离心管留在磁铁上，小心吸掉上清不搅浑沉淀。吸取上清时枪头不要对着沉淀物。最后一次
清洗，吸掉所有上清。
aa. 从磁铁取下离心管，此时管内不应有上清液。
bb. 加入75μl ChargeSwitchElution Buffer（E5）到离心管。
cc. 轻轻上下吹打10次重悬ChargeSwitchMagnetic Beads。
dd. 室温孵育1min。
ee. 把离心管放到MagnaRack上直至ChargeSwitch Magnetic Beads形成紧密沉淀，上清变清澈（约
1min）。
ff. 离心管留在磁铁上，小心转移含有DNA的上清到一个新的灭菌了的2ml离心管中，勿搅动
沉淀。吸取上清时，枪头不要对着沉淀。
gg. 弃去用过了的ChargeSwitch Magnetic Beads。
*DNA -20℃冷冻保存或继续进行DNA纯化去杂质
2. DNA纯化去杂质
2.1. 操作步骤
a. 加入75μl nucleasefree水到DNA样品中。
b. 加入750μl PowerCleanDNA Solution 1到DNA中。上下颠倒3-5次混匀。
c. 加入20μl PowerCleanDNA Solution 2，上下颠倒3-5次混匀。
注意：检查PowerClean DNA Solution 2，若有沉淀，60℃水浴并轻摇直至沉淀全部溶解。不要剧烈摇晃以免产生大量泡沫。可趁热使用。
d. 加入85μl PowerCleanDNA Solution 3，上下颠倒3-5次混匀。4℃孵育5min。
e. 室温10000g离心1min。
f. 避开沉淀，转移所有上清到一个干净的2mlCollection Tube（试剂盒提供）中。
g. 加入70μl PowerCleanDNA Solution 4，上下颠倒3-5次混匀。4℃孵育5min。
h. 室温10000g离心1min。
i. 避开沉淀，把上清转移到一个干净的2ml Collection Tube（试剂盒提供）中。
j. 摇匀PowerCleanDNA Solution 5。加入800μl PowerCleanDNA Isolation 5到上清中，涡旋5s
混匀。
k. 加载600μl上清液到Spin Filter中，室温10000g离心1min。
l. 弃去滤液，把剩余的600μl上清都加到Spin Filter上，室温10000g离心1min。
m. 弃去滤液。加入500μl PowerCleanDNA Solution 6到Spin Filer，室温10000g离心30s。
n. 弃去滤膜。
o. 室温13000g离心2min。
p. 小心把Spin Filter转移到一个新的2ml Collection tube（试剂盒提供）中。避免沾到任何PowerClean DNA Isolation 6。
q. 加入75μl PowerCleanDNA Solution 7到白色滤膜中心。
r. 室温10000g离心30s。
s. 弃去Spin Filter。-20℃冷冻保存直至PCR扩增。
3. 实时荧光定量PCR扩增
设计该操作流程/步骤是为使用Cepheid的SmartCycler分析猪源肝素样品中反刍动物DNA的存在。在其他操作平台上使用该步骤需要适当的加以调整以验证这部分是否符合（相对应平台的）标准程序。
3.1. 准备实时检测
a. 从冰箱中取出装有样品制备珠管的可重复用密封袋。从密封区域顶部的缺口
撕开袋子。
b. 从袋中取出所需数量的管子，并轻轻打开每一根管子。
c. 向每管中加入25 ?L无核酸水（无核酸污染的水），用枪头混合后盖上管盖。
d. 使用微量离心机将所有管子快速离心5s。
e. 珠子空白对照（珠子+无DNA的水）必须与每一批待测样品同时检测。
3.2. 步骤
a. 分装25 ?L先前准备好的预混液（珠子和水）至SmartCycler PCR反应管。
b. 向每一根对应的PCR反应管中加入1 ?L样品。
c. 盖上管盖，在SmartCycler离心机中离心5s。
d. 将PCR反应管放入SmartCycler区块的每一孔中并盖上各个盖子。
e. 准备运行程序：
f. 点击"CreateRun"图标。染料设置选择FCTC。
g. 选择操作规程（见3.3部分）。
h. 选择适当数量的位点（即在运行的PCR管的数量）
i. 给每一个位点标注一个与每管组分相对应的样品ID。
j. 点击"StartRun"。
注：阳性结果需要有一个循环阈值（Ct值）。
3.3 PCR反应条件
这一操作规程必须在PCR运行开始前加以设定。使用唯一的名称保存参数。
PCR程序：
第一阶段：95.0°C 120s（光学元件关闭）
第二阶段：45个循环
95.0°C 10s（光学元件关闭）
56.0°C 60s（光学元件开启）
注：分析时，Ct值应设定成缺省值30
4. 结果分析
染料设定为FCTC，用于荧光检测。反刍动物DNA的阳性结果的判定是一个样品在FAM通道45个反应循环之前出现Ct值。猪的材料的阳性结果是在TxR通道出现阳性的Ct值。内部扩增控制（IAC）在Cy5通道中报告，有助于降低假阴性报告。许多不同类型肝素样品含有抑制剂。本试验包括一个IAC，以确保PCR的条件是合适的，这样，最大限度地减少由热启动酶的抑制造成的假阴性结果报告。具体地讲，IAC可以反映样品中存在PCR抑制因子时报道的阴性结果。引物与探针能结合反应混合物中合成的序列。
当样品中没有PCR抑制因子，而靶目标没有扩增时，IAC应当产生Ct值为32-37之间的信号。如果目标样品是高浓度，IAC可能会也可能不会报告由于竞争而出现的扩增。这是正常的。
如果IAC在Ct值37处仍未出现，或者在目的扩增中没有报告（其Ct值），样品可能含有阻止目的检测的PCR抑制剂。如果观察到这一结果，建议将分装的新的肝素粗品重提并额外纯化后使用。
对于反刍动物样品的阳性结果，应当用PCR对同一DNA样品额外检测两次，即全部三次检测结果均为阳性的，则确认该样品为阳性。

Q2：德国肝素钠专用树脂工艺流程怎么处理

肝素钠的提取来源于猪小肠粘膜，通过2709蛋白酶酶解后得到肝素溶液，再加入氯化钠并升高温度后使猪小肠粘膜中的动物蛋白凝聚，使生成的肝素钠容易进行离子交换；采用稀氯化钠溶液洗涤后的强碱性离子交换树脂再用高浓度的氯化钠溶液洗脱，洗脱后的肝素钠在酒精溶液中沉淀、干燥制得肝素钠粗品；再将肝素钠粗品进行酸化去除酸性杂蛋白，再进行两次氧化的精制操作，制得产品的单位效价在每毫克140～150国际单位以上，而且产品为无菌、无热原产品，特别是在制备过程中没有废水污染环境.步骤：将重复利用后的树脂放入清水中浸泡，捞出滤干；将上述滤干后的树脂加入比重为23度的盐水中浸泡，过滤得到滤液，浸泡其间不断搅拌，盐水的加入量为树脂的0.7倍；将上述滤上物再加入比重为25度的盐水中浸泡，过滤得到滤液，浸泡其间不断搅拌，盐水的加入量为树脂的0.7倍；将滤液A和滤液B混合，加入85度的酒精直至滤液酒精度为35度为止，得到白色沉淀物为肝素钠；由于采取清水浸泡，使树脂充分扩张，又采用两次不同浓度的盐水进行浸泡，使树脂中吸附的肝素钠充分洗脱出来，既增加了肝素钠的提取量，又提高了树脂的反复吸附能力

Q3：肝素概念股有哪些

肝素钠上市公司简介
1、海普瑞(002399)：
公司是全球产销规模最大、也是我国唯一同时取得美国FDA认证和欧盟CEP认证的肝素钠原料药生产企业，其产品99%以上用于出口，出口数量和金额在国内排名第一。公司与APP公司合作成为美国大剂量标准肝素制剂市场的唯一原料供应商，“海普瑞”和“Hepalink”品牌已成为国际上肝素钠原料药质量的典范。公司旗下子公司肝素粗品生产企业成都深瑞畜已完成生产厂房和配套设施的主结构建设，山东瑞盛已完成土地平整和厂房设计，拟进行生产厂房和配套设施的建设。合资企业成都海通药业建成后将从事肝素制剂的生产和销售。国内最大的肠衣加工企业北大荒丰缘集团有限公司年产30吨肝素钠项目日前落户哈南工业新城。项目计划已于4月中旬开建，达产后将成为国内第二大肝素钠生产企业。公司指出，目前肝素产品的主要销售区域在国外市场，作为药品出口必须获得出口国的药政批准和注册，而这需要一定的时间。公司经过多年的市场发展，产品技术和质量已经被主要客户认可和接受，并且也建立起稳定的合作关系。
2、千红制药(002550)：
公司肝素产业链完整，国内市场份额领先。目前国内大部分肝素钠原料药生产企业没有制剂业务，而公司肝素产业链较为完整，公司拥有2个品规的肝素钠注射液药品生产批准文号，2009年将肝素钠原料药产量的6.53%用于自身生产肝素钠注射液产品。公司生产的肝素钠注射液属于国家基本药物目录产品。2009年，公司肝素原料药国内市场份额达到21.51%，为国内第一；公司肝素出口量为9557千克，出口金额达到6672.27万美元，排名国内第三。公司胰激肽原酶制剂主导国内细分市场。胰激肽原酶制剂为周围血管扩张类用药，主要应用于糖尿病并发症领域，替代性药物较少。随着我国糖尿病人数增加和诊断率的提升，未来治疗糖尿病并发症药品具有广阔的市场空间，预计未来几年国内胰激肽原酶制剂市场将保持较高扩容速度，到2015年胰激肽原酶全国市场销售额将达到9.11亿元。公司占据国内胰激肽原酶制剂60%以上的市场份额，我们认为公司作为国内胰激肽原酶制剂的龙头企业，将成为市场扩容的最大受益者。公司产品不局限于肝素，在酶制剂领域也有较强竞争优势。其中胰激肽原酶是其拳头产品，用于治疗糖尿病导致微循环障碍，属于优质优价品种，市场占有率在60%以上。目前覆盖1000多家医院，产品进入三分之一三级医院。胰激肽原酶制剂在各区域销售情况差别较大，江苏、天津、北京等地是其销售情况较好的地区。用得好的医院，例如江苏省人民医院，年销售额达到200万元以上。公司也在总结相关经验，逐步向其他地区推广。产品研发方向从生物提取向基因工程过渡，国家一类新药抗血栓蛋白完成临床前研究，有望年内进入临床阶段。
●肝素钠生产企业
上海第一生化药业公司 枣庄振兴生化制药厂
安徽丰原药业股份有限公司 杭州之江药厂
云南省曲靖康利制药厂 常州生物化学制药厂
成都通德药业有限公司 南宁生物化学制药厂
鹤壁市制药厂 成都生化制药厂
山东烟台康泰药业制品有限公司 四川正东制药有限责任公司
甘肃金盛生化制药有限公司 南京健友生物化学制药
上海第一生化药业公司 安徽丰原药业股份有限公司
云南省曲靖康利制药厂 成都通德药业有限公司
鹤壁市制药厂 山东烟台康泰药业制品有限公司
枣庄振兴生化制药 杭州之江药厂
常州生物化学制药厂 南宁生物化学制药厂
四川正东制药有限责任公司 成都生化制药厂
甘肃金盛生化制药有限公司 南京健友生物化学制药厂
南京生物化学制药厂 无锡市生物化学制药厂
苏州亚博生物工程有限公司 江苏吴江市生物制品厂
常州千红生化制药有限公司 徐州万帮生物化学制药厂
徐州万邦生化制药有限公司 杭州九源基因工程有限公司
安徽省桑尼生物药业有限公司 安徽蚌埠生物化学制药厂
济南长白山药业有限公司 东营市药化厂
枣庄市外贸生物化学公司 华懋双汇(集团)
武汉生物化学制药厂 长沙生物化学制药厂
丽珠集团苏州新宝制药厂 山东莱阳生物化学制药厂
烟台东诚生化有限公司 怀宁县生化制药厂
上海复旦张江生物医药有限公司 无锡市生物化学制药厂
上海生物化学制药厂 天津市川页生化制品有限公司

Q4：肝素钠粗品长期收留会变质吗?

这是低分子肝素钠的一个最普遍的副作用，因本品为抗凝剂，针头若刺伤毛细血管，会使皮下血管发生出血，故肉眼会看到淤青，所以一般会选脐周，血管较少的地方，打的时候还要捏起皮肤，保证注射至皮下，以免过深发生血肿。

Q5：肝素抗凝就是肝素钠抗凝吗?谢谢

是的 肝素分肝素钠和肝素钙 作用都一样的

Q6：为什么说肝素是高效的抗凝剂

肝素具有带强负电荷的理化特性，能干扰血凝过程的许多环节，在体内外都有抗凝血作用。其作用机制比较复杂，主要通过与抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）结合，而增强后者对活化的Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ和Ⅻ凝血因子的抑制作用。其后果涉及阻止血小板凝集和破坏，妨碍凝血激活酶的形成；阻止凝血酶原变为凝血酶；抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白。

Q7：肝素钠为什么要用鱼精蛋白拮抗

肝素钠药理作用：具有持久的抗血栓形成作用，是预防和治疗血栓栓塞性疾病的新药。经家兔静脉给药后，七种凝血指标测定体外抗血栓试验和大鼠体内三种抗血栓形成试验，表明吉派啉具有抗凝、抗血栓形成作用，与肝素一样，吉派啉首先与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)及其复合物结合,加强抗凝血酶Ⅲ对凝血酶和Xa因子的灭活，然而低分子肝素由于分子链较短,没有与凝血酶结合的部位，不能加强抗凝血酶Ⅲ对凝血酶的灭活表现出抗Xa因子活性强,对凝血酶影响小.吉派啉与肝素相比,抗Xa因子活性高于肝素,而延长APTT的作用不明显,因而抗Xa/APTT的比值比肝素大,且低分子肝素对Xa因子作用的维持时间大于对APTT所产生影响的时间.质量检验结果表明：抗Xa活性/抗Ⅱa活性比值为3～4,大于普通肝素(1∶1),所以,引起出血的可能性小于肝素,同时,吉派啉能促进血管t-PA的释放，发挥纤溶作用，能与血管内皮细胞结合，保护内皮细胞，增强抗栓作用,对血小板功能及脂质代谢影响也较肝素少。
静注LD50±平均可信限=5176.41±1751.9mg/kg(雌雄合计)
折合成anti-XaIU=434818.44±147159.50IU/kg
死亡的主要原因为胸腔内、肺、胃、肠道出血。
背部SC（雄鼠）±平均可信限=9412.39±2031.89mg/kg
折合成anti-XaIU=970640.76±17678.76IU/kg
死亡的主要原因为注射部位出血，肺和胃肠道出血。
亚急性、慢性、生殖毒性、致突变研究证明：用量大于治疗量2倍的情况下，未发现毒性反应。但在高剂量时，注射部位皮下会出现局部血肿。
药代动力学：皮下注射吸收快，生物利用度%80～90%，大于普通肝素（15%～25%）。在肝、肾聚积比普通肝素少，半衰期与Fragmin相似。按临床验证结果，静脉注射在慢性肾衰、接受血液透析患者的半衰期（T1/2）为4～5小时，比肝素显著长（3～4倍）。
适应症：抗凝血、抗血栓形成药，用于血液透析或血液过滤时，防止体外循环过程中血液凝固及预防血栓形成。
用法与用量： 1 用法：皮下注射和静脉注射。
2 用量：剂量单位以抗Xa因子活性单位（anti-XaIU）计算，血液透析、血液灌流：
2.1 单次剂量：常规治疗病人，以70～80anti-XaIU/公斤体重计量。
2.2 连续剂量：初次急性病人，开始前以30～40anti-XaIU/公斤体重计量以后，按每小时10～15anti-XaIU/公斤体重计量。
2.3 有出血危险的危重病人，开始前以10～15anti-XaIU/公斤体重计量以后按每小时5anti-XaIU/公斤重计量。
2.4 特殊情况（如体重＞60公斤，病人体重减轻/增加或血液状态改变）剂量应根据需要个体化调整。
不良反应：偶见异常皮肤粘膜出血、牙龈出血、皮疹及皮肤瘙痒等轻度过敏反应。
禁忌症：
注意事项： 1 有出血或出血倾向者慎用，孕妇及产后妇女慎用。
2 如因应用过量引起出血，可用鱼精蛋白拮抗，鱼精蛋白1mg可中和本品100anti-XaIU。
规格：（1）1ml∶2500IU;（2）2ml∶5000IU.
贮藏：遮光，在凉处保存。
有效期：暂定1年。
处方药：是鱼精蛋白【主要成分】本品为从适宜的鱼类新鲜成熟精子中提取的一种低分子量碱性蛋白质的硫酸盐。
【药理作用】硫酸鱼精蛋白是一种强碱，能与强酸性肝素钠或肝素钙形成稳定的盐而使肝素失去抗凝作用。本品作用迅速，静脉给药5分钟内即发生中和肝素的作用。但部分肝素可从复合物中再次解离。中和1单位不同来源的肝素所需鱼精蛋白量略有不同，1mg本品可中和90单位自牛肺制备的肝素钠或115单位自猪肠黏膜制备的肝素钠，或100单位自猪肠制备的肝素钙。鱼精蛋白—肝素复合物在体内代谢转化过程尚未被阐明。鱼精蛋白也是一种弱抗凝剂，过量可引起凝血时间指标短暂轻度延长。
【适应证】主要用于因肝素钠或肝素钙严重过量而致的出血症及自发性出血，如咯血等。
【不良反应】①本品快速静脉注射可引起低血压、心动过缓、肺动脉高压、呼吸困难、短暂面部潮红及温热感。缓慢静脉注入，10分钟内不超过50mg，可避免上述反应。②对鱼过敏，过去曾接受过本品或含鱼精蛋白的胰岛素（如中性鱼精蛋白胰岛素）者，易发生抗鱼精蛋白IgE介导的高敏或过敏反应。③男性不育症或输精管切除者中某些人易发生对鱼精蛋白高敏反应。在输注本品前给这类患者应用皮质激素或抗组胺药，可防止过敏。5足量鱼精蛋白中和肝素后8～9小时，个别在18小时后，部分患者可发生肝素反跳和出血。
【禁忌证】对本品有不耐受史或不良反应史者禁用。
【用法用量】抗肝素过量：静注，用量与最后一次肝素的用量及间隔时间有关。每1mg鱼精蛋白可拮抗100单位肝素。由于肝素在体内降解迅速，在注射肝素后30分钟，每100单位肝素，只需用鱼精蛋白0．5mg；每次用量不超过50mg，需要时可重复给予。抗自发性出血：静滴，5～8mg/kg体重/日，分2次，间隔6小时，每次以300～500ml生理盐水稀释后使用，3日后改为半量。
【注意事项】本品仅供静注，应缓慢给药。给药后即需作凝血功能检查。①对鱼过敏者慎用本品。②静注速度过快可致心动过缓、低血压、胸闷、呼吸困难、颜面潮红等。③妊娠及哺乳妇女应用本药必须有明确指征。至于本品对生殖能力的影响，是否有致畸、致癌作用，是否经乳汁分泌等问题，均缺乏动物实验资料。5本品宜单独给药，与某些抗生素（如青霉素、头孢菌素等）理化性质不相容